Asia Ⅰ型FMDV全衣壳蛋白基因在昆虫细胞中的表达与免疫活性分析

摘要

将Asia Ⅰ型FMDV全农壳蛋白P12A基因插入到带有蜂毒溶血肽信号序列的杆状病毒转移载体pMel-Bac中,构建重组转移载体pMel-P12A.然后将含有目的基因的转移载体与线性化的杆状病毒DNA共转染Sf9细胞,获得重组杆状病毒.以感染复数(MOI)10的重组病毒感染Sf9细胞,72 h后收获细胞,经Western blotting、间接免疫荧光检测,结果表明P12A基因在昆虫细胞中获得表达,相对分子质最约82 ku,与预测蛋白大小一致,且能被FMDV阳性血清所识别.免疫荧光检测表明表达蛋白主要集中在细胞膜部分.夹心ELISA检测结果表明一部分表达蛋白分泌至培养基中,而有一部分蛋白仍在细胞中未能分泌.表达蛋白加入等量佐剂乳化后免疫豚鼠,间接ELISA检测结果表明豚鼠免疫后15 d即产生了特异性FMDV抗体.本研究为空衣壳的体外组装及基因工程亚单位疫苗的研究进行了有益的探索.