新城疫病毒核衣壳蛋白基因在大肠埃希菌中的表达、纯化及其活性分析

摘要

构建新城疫病毒(Newcastle disease virus,NDV)核衣壳蛋白(nucleocapsid protein,NP)基因的原核表达载体,并将其在宿主菌BL21(DE3)感受细胞中表达.以NDV La Sota株NP蛋白基因序列为模板,设计特异性引物,通过PCR扩增获得NP蛋白全长基因片段,定向插入原核表达载体pET-30a,构建重组质粒pET-NDV NP;将构建的重组质粒转化宿主菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,表达出目的蛋白,并采用亲和层析的方法纯化表达蛋白:表达蛋白采用Westemn Blot方法检测其反应原性.结果显示,成功克隆出了新城疫病毒NP蛋白基因全长,片段序列l470bp;构建的pET-NDV NP载体经PCR、双酶切、测序鉴定均无误,转化表达宿主菌后经SDS-PAGE检测后目的基因得到成功表达,且表达蛋白经Ni-NTA镍离子亲和层析法被成功纯化,蛋白浓度为3mg/mL;Western Blot检测表达蛋白的反应原性结果显示表达蛋白具有良好的反应原性.本试验成功构建了含有新城疫病毒核衣壳蛋白基因的原核表达载体,成功表达、纯化得到了NDV NP蛋白.