猪清道夫受体SRA/CD204多克隆抗体的制备以及该受体介导的细菌吞噬功能分析

摘要

针对猪SRA/CD204胞外区对应的基因片段(614～1324 bp)进行引物设计,PCR扩增获得目的片段并克隆至原核表达载体pET-28a中,构建重组表达质粒pET-SRA-c.利用原核表达系统获得高效表达于包涵体中的重组蛋白rSRA-c(约32 kDa),利用亲和层析技术获得纯化的rSRA-c.利用纯化的rSRA-c为免疫原,免疫Ba1b/c小鼠(100 μg/小鼠),制备多抗血清.经Westernblot结果显示,该多抗血清不仅可以识别rSRA-c,而且可以识别真核表达的全长的猪SRA/CD204(约55 kDa).免疫荧光分析表明该多抗血清可以清楚地识别表达于CHO细胞膜上的SRA/CD204.最后,利用表达猪SRA/CD204的CHO细胞,对其介导的细菌吞噬功能进行了研究,结果表明猪SRA/CD204可以有效地介导大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的吞噬.本研究为进一步研究猪SRA/CD204在病原微生物感染中的作用奠定了基础.