山羊痘病毒P32基因的克隆及毕赤酵母中的表达

摘要

将人工优化合成的山羊痘病毒P32基因和表达栽体pPIC9K同时双酶切后相连,构建pPIC9K-IL-2重组表达载体.将线性化的载体pPIC9K-P32电转化毕赤酵母GS115,对重组酵母转化子经MD平板筛选和PCR分析鉴定后,经G418抗性梯度筛选,获得多拷贝重组菌株,甲醇诱导表达后进行SDS-PAGE和Western blot SDS-PAGE电泳显示出相对分子质量约为30 kDa目的蛋白表达条带,Western blot分析表明表达的蛋白具有反应原性.本研究成功构建载体pPIC9K-P32,并且P32基因已整合到酵母基因组中,为亚单位疫苗和鉴别诊断试剂奠定了基础.