乙型肝炎病毒P和X区siRNA表达载体的构建与鉴定

摘要

目的构建乙型肝炎病毒(HBV)P区和X区的小干扰RNA(siRNA)表达载体,并进行酶切鉴定,为进一步评价siRNA对HBV的抑制作用提供研究基础.方法根据siRNA的设计原则并经Blast比对,设计合成6条siRNA双链复合体,体外退火后在T4连接酶作用下连接入重组载体P-Silencer-cmv 4.1-hygro,连接产物转化JM109感受态细胞,筛选阳性克隆并提取重组体,经琼脂糖凝胶电泳初步鉴定,酶切产物经聚丙稀酰胺凝胶电泳确定插入片段,送公司测序鉴定.结果琼脂糖凝胶电泳得到与质粒大小相近的条带,聚丙稀酰胺凝胶电泳确定已插入大小约55bp的双链DNA片段,测序结果证实重组载体构建成功.结论构建的HBV的siRNA表达载体可用于进一步检测其对病毒的抑制作用.