乙型肝炎病毒siRNA表达载体的构建以及抗病毒治疗应用

摘要

乙型肝炎病毒siRNA表达载体的构建以及抗病毒治疗应用，本发明属基因工程技术领域。本发明根据siRNA的设计原则，分别选择HBV包膜蛋白(MS)编码区69nt-87nt，聚合酶(P)编码区708nt-726nt，核心蛋白(C)编码区2052nt-2070nt的核苷酸序列，设计相应的siRNA序列，用BLAST软件进行同源分析证实为HBV高度保守序列后，化学合成单链寡核苷酸，体外经退火形成双链DNA，与真核表达载体pTZU6+1连接，酶切鉴定和序列测定分析表明成功构建了三种靶向乙型肝炎病毒(HBV)基因序列的siRNA表达载体。上述表达载体通过阳离子脂质体介导与HBV真核表达载体pHBV共转染肝癌细胞HepG₂后，采用免疫荧光和Abbott实验均证实HBV siRNA具有较强抑制病毒复制和表达的作用。