UPLC-MS/MS法测定人血浆中25羟基维生素D的浓度及其应用

摘要

目的:建立测定人血浆中25羟基维生素D[25(OH)D]的方法,并将其应用于临床.方法:血浆样品经液-液萃取后,采用超高效液相色谱-串联质谱法测定.以氘代25(OH)D3为内标,色谱柱为Zorbax Eclipse PlusC18,流动相为水(含0.1％甲酸)-甲醇(含0.1％甲酸),梯度洗脱,流速为0.35 ml/min,柱温30℃采用电喷雾离子源,以多反应离子监测方式进行正离子扫描;用于定量分析的离子对分别为m/z 413.2→395.2[25 (OH) D2]、m/z 401.2→383.2[25 (OH) D3]、m/z 404.3→368.2(内标).结果:25(OH)D2与25(OH)D3血药浓度在2～80 ng/ml范围内线性关系均良好(r分别为0.998 0、0.999 9,n=3),其定量下限均为2 ng/ml,日间、日内RSD为0.78％～9.42％,相对偏差为-2.90％～1.95％.采用该法检测78例健康受试者及98例结核患者体内25(OH)D平均血药浓度分别为(21.53±6.33)、(8.84±4.05)ng/ml,差异有统计学意义(P＜0.01).结论:该方法准确、可靠、灵敏度高,适用于血浆中25(OH)D的定量分析及人体药动学研究.