RNA干扰抑制HMGB1基因表达对宫颈癌HeLa细胞生物学行为的影响

摘要

背景与目的:高迁移率族蛋白1(high mobility group box-1,HMGB1)是一种非组蛋白染色体蛋白质,在多种高转移性肿瘤中高表达.前期研究结果证实,HMGB1在宫颈鳞癌组织及宫颈癌HeLa细胞中高表达,并与肿瘤临床分期、侵袭、转移密切相关.本研究通过RNA干扰(RNA interference,RNAi)抑制HMGB1基因表达,观察其对HeLa细胞增殖、侵袭和迁移的影响.方法:将HMGB1 siRNA真核表达质粒PGCsi3.0-1在脂质体介导下转染HeLa细胞,G418筛选阳性克隆,以转染PGCsi3.0-Neg(无关序列SiRNA)质粒的细胞和未转染HeLa细胞作为对照.采用RT-PCR和Western blot检测HMGB1 mRNA和蛋白表达,通过MTT实验、细胞划痕实验和Transwel1实验分别检测HeLa细胞增殖、侵袭和迁移能力.结果:PGCsi3.0-1组HMGB1 mRNA和蛋白表达水平分别为0.38±0.12和0.10±0.44,PGCSi3.0-Neg组分别为1.19±0.25和1.90±0.35,未转染组分别为1.42±0.14和2.55±0.32,前组HMGB1 mRNA及蛋白表达水平与后两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05).MTT和细胞划痕实验显示,PGCsi3.0-1组细胞生长受到明显抑制,细胞迁移率降低(P<0.05).Transwel1实验显示PGCsi3.0-1组穿膜细胞数为18.0±4.2,低于PGCsi3.0-Neg组的62.0±3.5和未转染组的58.0±4.9(P<0.05).结论:应用RNAi能有效抑制HMGB1基因表达,进而抑SUHeLa细胞增殖、侵袭和迁移,为宫颈痛的基因治疗提供了新思路.