RNA干扰抑制宫颈癌Hela细胞株HMGB1的实验研究

摘要

目的：探讨RNA干扰(RNAinterference，RNAi)沉默HMGB1基因对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。 方法：构建靶向抑制HMGB1的siRNA表达载体(shRNA)，瞬时转染转染HeLa细胞，筛选有明显干扰效应的两组质粒PGCsi3.0-1、PGCsi3.0-3组作为实验组，并设立阴性对照组(PGCsi3.0-Neg组)。采用RT-PCR技术、Westernblot及细胞免疫组化技术分别对转染后24h、48h、72hHeLa细胞中HMGB1mRNA及蛋白的表达变化进行研究。MTT法、台盼兰实验检测细胞增殖情况，流式细胞仪检测细胞周期。 结果：通过预试验确定了构建的2种重组质粒PGCsi3.0—1组和PCCsi3.0-3组均能抑制HMGB1基因的表达。应用westen—blot方法检测Hela细胞中HMGB1蛋白表达，结果表明：转染重组质粒PGCsi3.0-1组和PGCsi3.0-3组的实验组HMGBl蛋白表达均明显低于阴性对照PGCsi3.0-Neg的表达；以转染后48h干扰效应最高，PGCsi3.0-1组、PGCsi3.0-3组蛋白抑制率分别为对照组56.52％、49.9％(p<0.05)。RNA干扰后72hPfCsi3.0-1组、PGCsi3.0-3组蛋白抑制率分别为54.7％、40.89％，两组相比较无统计学差异(P>0.05)。通过实时定量PCR检测到Hela细胞中HMGB1基因mRNA转录明显减少，抑制率分别为71.02％和56.11％；MTT法检测结果显示转染2种重组质粒PCCsi3.0—1组和PGCsi3.0-3组转染后的Hela细胞的增殖活性均明显下降；细胞周期结果显示转染PGCsi3.0-1组及PGCsi3.0-3组均能抑制Hela细胞周期由G2期进入S期，转染48h、72h后实验组G2期细胞中DNA含量均高于PGCsi3.0-Neg组及Hela细胞未转染组(p<0.05)；且S期细胞中DNA含量均低于空载体PGCsi3.0-Neg组及Hela细胞未转染组，差异均有统计学意义(p<0.01)。 结论：重组质粒PGCsi3.0-1组和PGCsi3.0-3组均可下调Hela细胞内源HMGB1的表达，HMGB1基因的下调可抑制Hela细胞的增殖活性。研究结果为HMGB1介导的肿瘤基因沉默疗法提供良好的实验基础，特别是为宫颈癌的基因治疗带来了新思路。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:符号说明

声明

前言

研究现状、成果

研究目的、方法

一、HMGBlsiRNA的设计、合成及PGC3.0载体构建

1.1对象和方法

1.2结果

1.3讨论

1.4小结

二、RNAi对宫颈癌细胞系Hela细胞HMGB1表达的影响

2.1对象和方法

2.2结果

2.3讨论

2.4小结

三、HMGB1 RNAi对Hela细胞肿瘤特性的影响

3.1对象和方法

3.2结果

3.3讨论

3.4小结

结论

参考文献

发表论文和参加科研情况说明

综述 RNA干扰在宫颈癌中的研究进展

致谢