RNA干扰Ku70基因对宫颈癌Hela细胞放射敏感性影响的实验研究

摘要

目的 观察ku70基因短干扰RNA(siRNA)对宫颈癌Hela细胞放射敏感性的影响.方法 采用集落形成技术测定不同剂量 射线照射对Hela细胞存活率的影响,观察Hela细胞对射线照射的敏感性.采用时定量PCR技术(quantitiv real time PCR,QRT-PCR)检测Ku70 mRNA水平表达.采用Western Blot免疫印记技术检测Ku70蛋白表达.采用RNA干扰 (RNAi)技术抑制Hela细胞中Ku70蛋白的表达,观察Ku70蛋白表达下调对Hela细胞放射敏感性的影响.采用集落形成技术测定4.0 Gy 射线照射对Hela细胞存活率的影响.进而分析Hela细胞对射线的放射敏感性.结果 宫颈癌Hela细胞对1.0-4.0 Gy 射线照射不够敏感,有相当高的辐射抗性.量效实验证实,1.0-6.0 Gy 射线照射后,HeLa细胞中Ku70 mRNA及Ku70蛋白表达均明显增高.时效实验证实,4.0 Gy射线照射后8 h-72 h,HeLa细胞中Ku70 mRNA及Ku70蛋白表达均明显增高.本实验成功的构建了Ku70基因RNA干扰载体 pSilencer-4.1-Ku70,稳定转染HeLa细胞后,有效抑制Ku70蛋白的表达.稳定转染pSilencer-4.1-Ku70干扰质粒并抑制Ku70蛋白表达后,HeLa细胞对 射线照射的放射敏感性显著增高(P<0.001).结论 Ku70 siRNA有效下调Ku70 mRNA水平,抑制Ku70蛋白的表达,可明显提高Hela细胞对辐射的敏感程度.本研究结果还提示,Ku70基因可作为衡量宫颈腺癌辐射敏感性指标,为临床合理筛选患者进行放疗、预测放疗疗效提供一条适用途径.