多重荧光定量PCR测定登革热Ⅰ～Ⅳ型方法的建立与初步评价

摘要

cqvip:目的探讨多重荧光定量PCR测定登革热Ⅰ~Ⅳ型方法的建立与初步评价。方法针对登革热Ⅰ~Ⅳ型使用自建的引物探针对反应条件及温度进行调整,且对阳性样本进行不同浓度的稀释,检测自建多重荧光定量PCR在登革热Ⅰ~Ⅳ型测定中的重复性、灵敏性及特异性。结果6份登革热阳性样本通过自建的检测方法来进行检测,全部能够显示明显的S曲线扩增,且与原有确证方法相比,不同型别的结果一致。其他10份病毒阳性样本及阴性样本全部没有显示扩增曲线,提示自建的检测方法特异性良好。分别检测登革热Ⅰ~Ⅳ型,变异系数(CV%)值水平范围:0.51~5.51,提示重复性较好。使用自建的多重荧光定量PCR对登革热不同型别进行检测的平均用时与ELISA法相比无显著差异(t=1.561,P>0.05)。通过自建的多重荧光定量PCR测定通过仪器来完成核酸的自动提取,在仪器当中加样、上机之后不需要另外的操作,充分降低了发生污染的风险。结论本次研究设计建立的登革热Ⅰ~Ⅳ型多重荧光定量PCR检测方法,在重复性、灵敏性及特异性方面均较为理想;且相比ELISA法在加样后无需另外手动操作,更加简易方便。