新疆某牛场大肠杆菌的分离鉴定及16S rRNA序列分析

摘要

为了调查新疆某规模化奶牛场犊牛腹泻的原因并确定病原,无菌采集15份腹泻犊牛粪样进行病原的分离培养,采用形态学观察、生化试验、血清学和致病性分析等方法鉴定分离菌株,利用大肠杆菌16SrRNA通用引物进行基因序列扩增并测序,使用DNAStar软件将分离菌株测序结果与GenBank中的其他菌株序列进行同源性比对,采用Mega 6.0软件依据16S rRNA序列构建分离株系统进化树并进行分析,同时对分离菌株的黏附性基因进行鉴定.结果 从15份样品中分离获得2株分离菌株;试验显示,分离株均发酵葡萄糖,MR试验、吲哚和甲基红试验呈阳性,硫化氢、氧化酶、DNA酶、VP试验呈阴性.2株分离菌株血清型均为O78,且均具有致病性.药敏试验显示,分离菌株均对环丙沙星、卡那霉素、氟哌酸、庆大霉素、磺胺甲(噁)唑、头孢哌酮、壮观霉素、多黏菌素B、呋喃妥因敏感.分离株16S rRNA基因序列与大肠杆菌菌株NF73_8(GenBank登录号:MT649856)同源性为≥99.7％,且处于同一大分支.经PCR鉴定,分离菌株具有K88黏附性基因.本研究结果证实了引起新疆某规模化奶牛场犊牛腹泻的病原为致病性产肠毒素型大肠杆菌.