蓝舌病病毒VP7蛋白的原核表达及免疫原性鉴定

摘要

为获得蓝舌病病毒(bluetongue virus,BTV) 25型的VP7原核表达蛋白,本试验以蓝舌病病毒重组质粒为模板,PCR扩增VP7基因,将其克隆于pET-24b(+)表达载体中,获得pET-24b-BTV-VP7重组质粒.经酶切和测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21 (DE3)受体菌,IPTG诱导表达His-BTV-VP7蛋白.在变性条件下用镍亲和层析柱纯化His-BTV-VP7蛋白,经Western blotting及ELISA鉴定其免疫原性.结果显示,His-BTV-VP7蛋白以包涵体形式表达,大小约为40 ku;Western blotting和ELISA检测此原核表达蛋白能与山羊阳性血清发生特异性反应,具有良好的免疫原性.本研究为后续建立蛋白芯片检测方法奠定了基础.