蓝舌病病毒1型衣壳蛋白VP2、VP5、VP7酵母双杂交诱饵质粒的构建及鉴定

摘要

蓝舌病(Bluetongue,BT)是由呼肠孤病毒科环状病毒属蓝舌病病毒引起的反刍动物虫媒(如库蠓、伊蚊等)传染病.蓝舌病病毒基因组由10个大小不同的双股RNA组成,分别编码7种结构蛋白(VP1～VP7)和4种非结构蛋白(NS1、NS2、NS3/NS3A、NS4).其中VP2蛋白由L2基因(2900bp左右)编码,以三聚体的形式存在;VP5蛋白是由M6基因(1639bp)编码,也以三聚体形式存在,VP5蛋白比较保守,是BTV的另一个型特异性抗原,它与VP2共同决定BTV的血清型;VP7蛋白是由S7基因(1156bp)编码的,它高度保守,是BTV的主要核心粒子,含有群特异性抗原决定簇.本实验分别构建了酵母双杂交系统中三个诱饵质粒pGBKT7-VP2、pGBKT7-VP5与pGBKT7-VP7,并验证其自激活和毒性作用,为今后利用绵羊肾细胞的cDNA文库筛选互作蛋白,以及开展BTV与宿主细胞的相互作用研究奠定了基础.本实验所构建的三个诱饵质粒经验证均无自激活活性和毒性作用，以期进一步筛选与其相互作用的宿主细胞靶蛋白并研究其在病毒感染和致病性方面所起的重要作用，为今后利用酵母双杂交系统筛选相关蛋白，深入研究BTV的侵染机制奠定了基础。