抗STa多克隆抗体的制备、鉴定和纯化

摘要

产肠毒素大肠杆菌(ETEC)可引起人及动物急性腹泻,其关键毒力因子为耐热肠毒素(ST).由于ST是一种具有强烈毒性但缺乏免疫原性的小分子肽,如何在保持其免疫原性的同时减弱其毒性已成为制备ST类毒素疫苗的研究热点.本试验以利凡诺法提纯兔血清白蛋白(RSA),经0.2％戊二醛活化,再与人工合成的甲醇可溶性STa偶联,十二烷基硫酸钠—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)结果显示获得分子质量约108.5 ku的完全抗原.用该偶联物免疫新西兰白兔4次,采集抗血清并用Protein A/G琼脂糖小珠进行纯化,斑点酶联免疫吸附试验(dot-ELISA)和免疫印迹(Western blotting)结果显示抗血清效价均为1∶400.试验结果表明抗STa多克隆抗体成功制备,这为筛选ST结构类似物做有益的铺垫.