鸡α-干扰素基因克隆及其在大肠杆菌中表达

摘要

根据GenBank中鸡IFN-α基因设计引物对,利用PCR技术克隆并测定了SPF鸡的IFN-α基因,再在成熟肽基因两侧设计一对引物,分别加入合适的酶切位点,将其亚克隆在表达载体pET上,转化BL21 (DE3)后用1PTG诱导表达,用SDS-PAGE电泳分析表达形式,结果为蛋白以包涵体形式表达.提取的包涵体用7 mol/L盐酸胍变性,利用胱氨酸一半胱氨酸再氧化法对包涵体变性液进行分段稀释法复性.细胞病变抑制法(CEF-VSV为基本检测系统)测定复性液的抗病毒活性不低于107.0U/mL.