枯草芽孢杆菌6-磷酸葡萄糖脱氢酶的纯化及性质

摘要

枯草芽孢杆菌通过超声破壁,(NH4)2SO4分段盐析,DEAE-Sepharose FF离子交换层析,Blue-Sepharose CL-6B亲和层析,Sephadex G-200凝胶过滤等纯化步骤,分离出6-磷酸葡萄糖脱氢酶.经PAGE和SDS-PAGE检测为单一蛋白区带,比活1.7375IU/mg,纯化倍数72.7,收率13.6%.凝胶过滤法测定表观分子量220KD,SDS-PAGE测定亚基分子量50.5KD,可见该酶是由四个相同亚基构成的四聚体.测定最适pH、温度分别为8.5,37℃,底物G6P的Km值0.177mmol*L-1.考察了部分金属离子及EDPA对该酶活性、紫外、荧光光谱的影响.