D-氨基酸脱氢酶在不同宿主中发酵产酶条件优化

摘要

大肠杆菌产D-氨基酸脱氢酶存在破胞问题,酶活越高,破胞问题越严重,为解决这一问题,本实验室构建出一株高表达D-氨基酸脱氢酶的大肠杆菌菌株,并把连接目的基因的重组质粒转化到毕赤酵母菌中,优化了D-氨基酸脱氢酶在两种宿主中的发酵产酶条件。对大肠杆菌产D-氨基酸脱氢酶诱导温度、诱导pH、起始诱导OD600值和发酵时间进行优化,在25℃、pH 6.5、OD600为35的条件下诱导,酶活为86.0 U/mL,比优化前提高了34.4%。选择38 h左右放罐,此时D-氨基酸脱氢酶发酵液酶活为79.0 U/mL,上清液酶活占20%。通过对毕赤酵母产D-氨基酸脱氢酶诱导温度、诱导pH和溶氧值进行优化,确定诱导条件为28℃、pH 6.0和溶氧值为20%,此时D-氨基酸脱氢酶酶活为140.5 U/mL,比优化前提高了58.9%,且无破胞现象。