D-氨基酸氧化酶在不同毕赤酵母宿主菌中的表达比较

摘要

D-氨基酸氧化酶(DAAO)在转化头孢菌素C生产7-ACA和转化DL-氨基酸制备α-酮酸和L-氨基酸上起着重要的作用.采用DNA操作技术,将来源于三角酵母的DAAO基因连接至表达载体pPIC3.5K上,再将表达质粒pPIC3.5K-DAAO分别整合P. pastoris的宿主细胞KM71和GS115,经筛选获得阳性重组菌PDK13(MutS)和PD27(Mut+).重点对两种突变菌的表达条件进行了比较.结果显示:PDK13(MutS)株比PD27(Mut+)株消耗甲醇慢、诱导时间长,但对通气量要求低、表达水平高,摇瓶活力分别达到2700和2500 IU/L,14L发酵罐内活力分别达到10140和8463 IU/L.初步探索了DAAO对DL-苯丙氨酸的拆分,结果显示基因工程菌表达的DAAO具有良好的转化DL-苯丙氨酸制备苯丙酮酸和L-苯丙氨酸的能力.