人IL-24基因原核表达载体的构建及蛋白的表达纯化

摘要

构建人白细胞介素24(IL-24)原核表达载体并利用ELP-Intein系统表达纯化可溶性的IL-24蛋白.通过PCR扩增不合信号肽的人IL-24基因,将IL-24基因插入pET-ELP-Intein质粒构建重组表达载体pET-ELP-Intein-IL-24.将重组质粒转化至E.coliBLR(DE3),20℃下经IPTG诱导表达.利用ELP蛋白在不同温度下发生相变的特点和Intein蛋白的自切割反应纯化可溶性IL-24蛋白,将纯化得到的IL-24蛋白进行Western blot鉴定.用Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测IL-24蛋白的生物学活性.成功构建了重组表达载体pET-ELP-Intein-IL-24,第一次通过原核表达方法表达并纯化出了可溶性的IL-24蛋白.Western blot检测显示目的蛋白能与IL-24抗体特异性结合,表明纯化出的蛋白确实为IL-24蛋白.细胞凋亡检测实验证明IL-24蛋白能显著地诱导hepG2细胞发生凋亡.