miR-181b慢病毒载体的构建及其对HEK-293T细胞MAPK1基因的靶向调控作用

摘要

目的 构建miR-181b慢病毒过表达载体,探讨其对HEK-293T细胞MAPK1基因的靶向调控作用.方法 分别构建pSicoR-miR-181b及pmiR-Report-MAPK1过表达载体,转染HEK-293T细胞后,用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测MAPK1 mRNA的表达、用Western blot检测MAPK1蛋白的表达及用双荧光素酶报告基因活性验证miR-181b与MAPK1的靶向调控关系.结果 成功构建了pSicoR-miR-181b及pmiR-Report-MAPK1重组质粒,miR-181b过表达明显抑制HEK-293T细胞MAPK1蛋白及mRNA表达水平(P＜0.05),抑制miR-181b的表达后,MAPK1的蛋白及mRNA的表达水平上调(P＜0.05).结论 成功构建pSicoR-miR-181b慢病毒载体,并证实通过靶向作用MAPK1-3'UTR的特异序列直接抑制MAPK1基因的表达.