NP-9莫诺苷促进脑卒中后微循环网络重构作用

摘要

目的:脑卒中具有高发病率、高致残率、高死亡率的特点,是严重危害人类生命健康一大疾病,虽然一直以来是临床及基础研究的热点,但目前除溶栓外仍缺乏有效的神经保护治疗手段。脑卒中后梗死周边区域微血管的数目的增多能有效改善区域微循环,改善患者神经功能。寻找促进梗死周边微循环网络重构的有效手段对脑卒中再生修复治疗有重大的意义。莫诺苷是我们课题组从中药山茱萸中提取的中药单体化合物,前期研究表明其具有抗炎、抗氧化、神经营养等特性,能够缩小脑梗死体积,改善神经功能,对于局灶性脑缺血大鼠预后有着积极的影响。本研究拟从多个水平系统评估莫诺苷对血脑屏障重构和微血管功能完整性的作用,并探讨微循环网络重构的可能机制。方法:选取体重在(260~280)g之间的SD雄性大鼠,线栓法制作大鼠大脑中动脉阻塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)局灶性脑缺血再灌注模型。造模成功者随机分为假手术组、模型组、莫诺苷低剂量组(30 mg·kg-1)、莫诺苷中剂量组(90 mg·kg-1)和莫诺苷高剂量组(270 mg·kg-1)。激光散斑(PSI)进行皮层血流量监测。乳胶灌注取材检测血管数量。给药3天、7天、14天、28天后分别用灌注取脑和新鲜取脑的方式,收集实验标本,运用免疫组织化学法、免疫荧光法以及免疫印迹法检测血脑屏障通透性和血管新生相关指标。结果:①MCAO造模72 h后,大鼠患侧大脑EB染液渗透量增加,表明血脑屏障被破坏。而给予莫诺苷可通过下调梗死半暗带皮层MMP-9和MMP-2的表达,降低患侧皮层IL-1β的水平,进而抑制脑缺血早期血管的通透性。激光散斑仪对大鼠全脑皮层血流量监测结果表明:在缺血水平一致的情况下,莫诺苷给药显著促进大鼠缺血侧大脑血流恢复。乳胶灌注方法检测结果显示,莫诺苷给药能增加梗死侧大脑提供血供的血管数目,尤其有利于末端血管或小血管的生长。②MCAO造模7天后,大脑梗死周边区域,内皮祖细胞激活,血管芽生,特异性表达于芽生血管伪足上的p-FAK表达增加;同时脑缺血刺激引起促血管新生因子Ang-1及其受体Tie-2,以及NRP-1、FGF-2、VEGF等蛋白的表达升高。莫诺苷能进一步激活内皮祖细胞增殖,提高促血管生成因子的表达水平,增加皮层梗死半暗带血管数量,并将血管新生维持到28天。结论:以上结果表明,莫诺苷能减轻脑缺血早期血脑屏障损伤程度,并能够促进后期血管新生及微血管完整性修复,增加皮层梗死区域周边新生血管数量,改善脑卒中后微循环,为脑血管病的再生修复治疗提供基础。