莫诺苷促进缺血性脑卒中后神经血管单元微血管功能修复

摘要

目的：缺血性脑卒中有高发病率、高致残率、高死亡率的特点,是严重危害人类健康的三大疾病之一.虽然一直以来是临床研究的热点,但目前除溶栓外仍缺乏有效的神经保护治疗手段.如不能通过有效手段对脑缺血后24h～72h血脑屏障的第二次开放进行干预,将造成不可逆转的神经血管功能损伤.本课题组致力于研究的莫诺苷具有抗炎、抗氧化、神经营养等作用,对于局灶性脑缺血大鼠预后有着积极的影响,能够有效促进局灶性脑缺血大鼠SVZ区的神经发生,促进大鼠脑缺血后神经功能的恢复.本研究基于脑卒中治疗"神经血管稳态重构"假说,探讨莫诺苷对血脑屏障重构和微血管功能完整性的作用,包括对脑卒中早期的血脑屏障通透性作用和修复期血管新生作用.rn 方法：选取体重在260g-280g之间的SD雄性大鼠，用线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。缺血30min后再灌注，待大鼠清醒后应用Zea Longa法对其进行神经功能行为学评分，以评估造模是否成功。造模成功者随机分为假手术组、模型组、莫诺苷低剂量组(30mg/kg )、莫诺苷中剂量组(90mg/kg)和莫诺苷高剂量组(270mg/kg)。给药3天和7天后分别用灌注取脑和新鲜取脑的方式，收集实验标本。运用免疫组织化学法、免疫荧光法以及免疫印迹法检测血脑屏障通透性和血管发生相关指标。rn 结果：(1) MCAO造模72h后，大鼠患侧大脑EB染液渗透量增加，表明血脑屏障被破坏。而给予莫诺苷可通过下调梗死半暗带皮层MMP-9和MMP-2的表达，降低患侧皮层IL-1β的水平，进而抑制脑缺血早期血管的通透性。(2)MCAO造模7天后，内皮祖细胞激活，梗死半暗带皮层的新生血管数量比假手术组有所增加:同时脑缺血刺激引起促血管新生因子Ang-1及其受体Tie-2，以及NRP-I , FGF-2, VEGF等蛋白的表达升高。莫诺苷能进一步激活内皮祖细胞增殖，提高促血管生成因子的表达水平，增加皮层梗死半暗带血管数量，并将血管新生维持到28天，促进脑缺血后期微血管完整性修复，最终促进血脑屏障的重构。rn 结论：莫诺苷对脑缺血后早期BBB的损伤具有保护作用，并能够提高脑缺血再灌注7天后皮层梗死区域周边新生血管数量，促进血管新生，对恢复神经血管单元微血管功能完整性有显著的作用。结合前期对莫诺苷促进脑缺血后神经发生作用的研究，进一步验证了脑卒中治疗“神经血管单元稳态重构”假说，将为脑卒中神经保护药物的研究提供了新思路。