酒类酒球菌mleP基因的克隆及其在酿酒酵母中的表达

摘要

苹果酸通透酶具有协助苹果酸-乳酸发酵(MLF)的重要功能.以酒类酒球菌(Oenococcus oeni)优良菌系Oenococcus-Lee-SD-2a的总DNA为模板,用PCR方法克隆到苹果酸通透酶基因mleP,构建了重组质粒pBMmleP.序列分析表明克隆到的基因序列与已报道的序列同源性为99%.为使目的基因在酿酒酵母中表达,以大肠杆菌-酿酒酵母穿梭质粒YEp352为载体,以PGK1强启动子和ADH1终止子为调控元件,构建了重组表达质粒YEpmleP,并转化酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)YS58.酵母转化子用含有亮氨酸、组氨酸和色氨酸的YNB平板筛选鉴定.获得的转化子在添加了L-苹果酸(5g/L)的培养基中培养4d;取培养液上清用HPLC检测,结果显示重组转化子YSP的培养液中L-苹果酸剩余含量均低于空载体转化子YS352,因此所得酵母重组转化子对苹果酸的转运能力有所提高.