酒类酒球菌苹果酸—乳酸酶基因mleA的克隆

摘要

苹果酸—乳酸酶是进行MLF的关键酶.该研究以酒类酒球菌31DH(Oenococcus oeni 31DH)的基因组DNA为模板进行其苹果酸—乳酸酶基因mleA的PCR扩增.PCR引物为5′-CGGAATTCATGACAGTC-CAGTAAGTAT-3′和5′-TAGGTACCACACTCTCAACACTCGTAAT-3′,引物的5′端分别引入EcoRI和KpnI酶切位点.得到的PCR产物约1.6kb.PCR产物回收后用EcoRI-KpnI双酶切,与经同样双酶切的质粒YEp352(大肠杆菌-酵母穿梭载体)进行连接并转化大肠杆菌感受态细胞,筛选重组质粒并用酶切及PCR验证.获得的酒类酒球菌苹果酸—乳酸酶基因的重组质粒命名为pLmleA.