平菇漆酶基因在毕赤酵母中的分泌表达及酶学性质研究

摘要

采用RT-PCR技术克隆到一个平菇(Pleurotus ostreatus)漆酶基因的全长cDNA,命名为lccPo1,其序列提交GenBank,登录号为AY450404.将其ORF克隆到毕赤酵母表达载体pHBM906,转化3株毕赤酵母GS115、KM71和SMD1168,该漆酶基因在3种毕赤酵母菌株中均实现了分泌表达.3种摇瓶培养条件:①25℃,1.0%(V/V)甲醇;②20℃,1.0%(V/V)甲醇;③20℃,0.5%(V/V)甲醇,进行比较研究后发现适当提高甲醇浓度有利于漆酶在低温条件下表达,而降低培养温度到20℃则可以提高漆酶的产量2～6倍.3株重组毕赤酵母在其最适反应条件下测得三者粗酶液最高漆酶酶活分别为3.19U/mL[GS115(pHBM565)]、2.56U/mL[KM71(pHBM565)]和2.49U/mL[SMD1168(pHBM565)].对重组酶进行相关的酶学性质分析表明,三者的最适反应pH值约为4.2,最适反应温度约为60℃.重组毕赤酵母GS115(pHBM565)所产酶的热稳定性稍好,在pH稳定性方面三者没有太大差异.