建兰花叶病毒单克隆抗体的制备及检测应用

摘要

用建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)免疫的BALB/C鼠脾细胞与SP2/0鼠骨髓瘤细胞融合,经筛选克隆,获得3株能稳定传代并分泌抗CymMV单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞(2C6、5B7和12G9),分别制备它们的单抗腹水.其中5B7和12G9 2株单克隆抗体腹水间接ELISA效价达10-6,3株单抗的抗体类型及亚类均为IgGl,轻链均为κ链.利用单克隆抗体建立了抗原包被间接ELISA(ACP-ELISA)检测CymMV的方法.蝴蝶兰病叶作1∶10240倍稀释、提纯CymMV病毒浓度为4.87ng/mL(每孔的病毒绝对量为0.487ng)时,该方法仍能检测到病毒.利用ACP-ELISA方法检测了田间样品,发现CymMV在兰花上发病很普遍.