建兰花叶病毒TGB1基因的原核表达及多克隆抗体制备

摘要

以GenBank中的CyMV-TGB1 (GenBank登录号:HQ681906.1)基因全序列设计1对特异性引物,采用RT-PCR从感染建兰花叶病毒的白花刺果曼陀罗叶片总RNA扩增出该病毒的TGB1基因.测序结果表明,该TGB1基因全长702 bp,编码233个氨基酸残基.构建了原核表达载体pET32a(+)-TGB1,将重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),在25℃以1.0 mmol/L IPTG诱导表达重组蛋白基因.SDS-PAGE分析表明,重组蛋白分子量约为44 ku,与预测相符.以该重组蛋白为抗原免疫新西兰大白兔,制备的抗体效价达1:25 600.