鸡白痢沙门氏菌生物被膜形成相关基因rpoE的鉴定

摘要

[目的]通过鸡白痢沙门氏菌基因表达和缺失株生物特性的测定,鉴定其生物被膜形成的相关σ因子.[方法]利用结晶紫染色定量法测定沙门氏菌生物被膜形成能力;通过触酶试验测定rpoS活性,确定rpoS基因依赖性和非依赖性生物被膜形成株;利用建立的荧光定量PCR方法比较rpoS基因非依赖株在指数期和生物被膜形成期6个σ因子的基因表达差异;运用Red同源重组系统构建所鉴定σ因子基因缺失株,并测定野生株和基因缺失株对于环境应激的抵抗力差异.[结果]鸡白痢沙门氏菌S6702能够形成生物被膜,触酶试验阴性,确定S6702为rpoS基因非依赖性生物被膜形成株;荧光定量PCR检测显示,培养4-24 h后S6702中rpoE基因表达量最高;与野生株相比,△rpoS缺失株保留了生物被膜形成能力,而△rpoE缺失株不能形成生物被膜.rpoS和rpoE基因缺失株对于环境应激的抵抗力均显著降低.[结论]在rpoS基因非依赖性生物被膜形成株中,rpoE基因为参与生物被膜形成调控的σ因子之一,这一发现可用于进一步研究沙门氏菌生物被膜形成的调控机制.