用酵母双杂交筛选与HIV Tat相互作用的宿主因子

摘要

目的 通过酵母双杂交试验筛选与HIV Tat蛋白相互作用的宿主因子.方法 对构建的pGBKT7-tat进行自激活和半乳糖苷试验.运用酵母双杂交实验以HIV Tat作为诱饵,与人均一化基因库进行初筛.对筛选出来的阳性克隆进行测序分析.结果 构建的pGBKT7-tat无自激活特性和细胞毒性,然后进行酵母双杂交试验.结果发现在DDO/X/A平板上出现47个阳性的蓝色斑点,在QDO/X/A平板上进行进一步筛选,对再次出现的8个蓝色斑点进行测序.在GenBank中对相互作用的人体基因进行BLAST分析,根据基因注释推测其在病毒与机体相互作用过程中可能发挥的作用.结果测出5个不同的基因,这5个不同的基因分别为羧肽酶N、酪氨酸磷酸酶受体M、ATP1B1、锌指蛋白MYM2和锌指蛋白MYM5.结论 本研究新筛选出羧肽酶、酪氨酸磷酸酶受体和ATP1B1病程相关蛋白及两个锌指蛋白等5种功能蛋白与HIV Tat相互作用,为进一步研究HIV Tat蛋白功能提供依据.