酵母双杂交筛选与猪附红细胞体α-烯醇化酶相互作用的宿主蛋白

摘要

为了解猪附红细胞体的感染机制,本试验利用酵母双杂交方法,筛选与猪附红细胞体α-烯醇化酶相互作用的宿主蛋白.采用定点突变引物和Overlap-PCR方法扩增猪附红细胞体α-Eno基因的全长序列,扩增产物经双酶切后插入酵母双杂交诱饵载体pGBKT7中,将重组质粒转化至酵母菌株Y2H中,检测诱饵载体有无毒性作用和自激活现象,利用酵母双杂交系统从猪外周血单个核细胞(PBMC)文库中筛选与α-Eno相互作用的宿主蛋白.结果显示,构建的诱饵载体pGBKT7-α-Eno无毒性作用和自激活现象.以pGBKT7-α-Eno为诱饵,筛选共获得了4个与α-Eno蛋白存在相互作用的宿主蛋白:β-肌动蛋白、前导丛生蛋白、60S核糖体蛋白L11、核酸内切酶/反转录酶.本试验通过酵母双杂交技术筛选出与猪附红细胞体α-Eno相互作用的多种宿主蛋白,为进一步研究猪附红细胞体的感染机制奠定了基础.