RNA干扰技术抑制肺癌细胞外源性绿色荧光蛋白的表达

摘要

cqvip:目的:构建针对绿色荧光蛋白(GFP)基因的发夹结构RNA(small hairpin RNA,shRNA)表达载体(pshRNA-GFP),观察对肺癌A549细胞的GFP特异性抑制作用。方法:设计针对GFP基因的shRNA序列,构建pshRNA-GFP质粒。与报告基因质粒PEGFP-N1共转染A549细胞,分别用激光共聚焦扫描显微镜(Laser confocal scanning micro-scope,LCSM)和流式细胞术检测干扰效果。结果:瞬时共转染pshRNA-GFP质粒和PEGFP-N1质粒后,荧光显微镜观察结果显示A549细胞中发出荧光的细胞数量减少,荧光强度明显降低。流式细胞术检测阳性细胞百分率降低至32.4%,差异有显著性。结论:靶向GFP的shRNA表达质粒能有效而特异抑制GFP在A549中的表达,A549细胞中存在RNA干扰现象。