RNA干扰技术抑制mPcdh18绿色荧光融合蛋白表达的研究

摘要

本文将含有mPcdh18基因的真核表达载体pEGFP-mPcdh 18转染到小鼠胚胎成纤维细胞(mouse fibroblast cell line NIH/3T3)中进行融合表达,用荧光显微镜观察到mPcdh 18-GFP融合蛋白呈点状分布于NIH/3T3细胞的细胞质中.根据mPcdh18基因的序列,设计并体外化学合成了特异性干扰mPcdh18的siRNA(siRNA-mPcdh18),与pEGFP-mPcdh 18共转染到NIH/3T3细胞中,通过荧光显微镜观察不同时间点的荧光强度变化,转染72h后,流式细胞仪检测,根据荧光信号的变化判断siRNA对mPcdh18基因的干扰效果.与序列非特异性siRNA(siRNA-negative)阴性对照相比,转染后24～48h,共转染siRNA-mPcdh18和pEGFP-mPcdh 18的实验细胞中发荧光的细胞数量较阴性对照少80％～90％左右,说明体外化学合成的siRNA-mPcdh 18可有效抑制NIH/3T3细胞中外源导入mPcdh 18基因的表达.