小鼠睾丸特异性基因Vad1.2重组蛋白的构建及多克隆抗体制备

摘要

目的:构建小鼠睾丸特异性基因Vad1.2重组蛋白,制备多克隆抗体.方法:将小鼠睾丸组织Vad1.2转录本行RT-PCR扩增,通过DNA重组技术插入克隆载体pET15b,进行酶切及DNA序列分析.将表达载体转化入大肠杆菌BL21(DE3) RIL感受态细胞,10 mmol/L IPTG诱导表达重组蛋白,通过10％ SDS-PAGE、Westernblotting及质谱分析进行鉴定.随后对重组Vad1.2蛋白进行纯化和进一步鉴定.最后,制备兔抗小鼠Vad1.2多克隆抗体,并通过Vad1.2-EGFP质粒转染GC-2spd(ts)细胞对其特异性进行验证.结果:大肠杆菌BL21(DE3) RIL细胞中诱导表达并纯化的小鼠Vad1.2重组蛋白构建正确并经Western blotting和质谱分析得到证实.所制备的多克隆抗体可特异性识别GC-2spd(ts)细胞中过表达的Vad1.2-EGFP融合蛋白.结论:成功构建小鼠Vad1.2重组蛋白,并制备多克隆抗体,为Vad1.2基因的进一步研究奠定了实验基础.