PLP-I基因在小鼠睾丸中的表达定位及多克隆抗体制备

摘要

目的:
　　Prolactin-like protein I，简称PLP-I，又名PLP-J、Prlpj、Prlpi、prl3c1，与其他PRL基因家族成员不同，PLP-I是目前新发现的一种催乳素样基因。据文献报道，PLP-I主要在雌性胎盘蜕膜组织中有表达，在雄性无表达。本课题组发现，PLP-I在雄性睾丸中也有表达。因此本研究拟探索PLP-I在小鼠睾丸中的表达定位，并制备多克隆抗体及PLP-J上调表达慢病毒，为深入研究PLP-J基因功能奠定基础。
　　方法:
　　采用原位杂交、免疫组化及免疫荧光方法对PLP-I在小鼠睾丸中表达进行定位，采用RT-PCR方法与Western Blotting方法检测不同年龄段mRNA表达水平与蛋白表达水平。
　　设计多肽肽段序列，构建原核表达载体PET30a-PLP-I，通过IPTG诱导，获得纯化抗原，免疫兔，获得PLP-I抗体。
　　构建慢病毒过表达载体，制备和包装PLP-I过表达慢病毒，转染TM3睾丸Ledig细胞，筛选稳定细胞株，采用RT-PCR及WB分别检测PLP-I基因过表达后的mRNA及蛋白表达水平。采用流式细胞仪检测细胞周期改变情况。
　　结果:
　　1.RT-PCR以及WB结果显示PLP-I在小鼠睾丸中有表达，且表达趋势为成年组最高，18day组最低。
　　2.ISH及IHC法结果显示PLP-I阳性表达于小鼠睾丸Ledig细胞，IF染色法结果显示PLP-I在TM3 Ledig细胞的胞浆中表达。
　　3.成功制备PLP-I抗体。
　　4.慢病毒介导PLP-I过表达，细胞周期及细胞凋亡实验研究表明PLP-I可能不影响细胞增殖与凋亡。
　　结论:
　　首次发现PLP-I在雄性小鼠睾丸中表达，其主要定位于睾丸Ledig细胞中;PLP-I过表达对TM3细胞增殖与凋亡无明显作用。

目录

声明

英汉缩略语名词对照

摘要

前言

第一部分 PLP-I基因在睾丸组织中的表达

前言

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 小结

第二部分 PLP-I基因抗体制备及纯化

前言

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 小结

第三部分 PLP-I基因慢病毒制备及其对TM3细胞生长周期及细胞凋亡的影响

前言

1 材料

2 方法

3 结果

4 讨论

5 小结

全文总结

参考文献

文献综述

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文