新肿瘤睾丸抗原Ropporin重组蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备

摘要

目的:构建新肿瘤睾丸抗原Ropporin原核表达载体,表达和纯化人Ropporin重组蛋白,并制备其兔抗血清.方法:人Ropporin全长cDNA克隆入pQE30载体,在大肠杆菌中利用IPTG诱导表达并纯化人Ropporin重组蛋白.利用人Ropporin重组蛋白免疫兔,制备人Ropporin多克隆抗体.结果:以构建的pQE30-Ropporin质粒转化大肠杆菌后,在IPTG诱导下表达和纯化得到相对分子质量与鼠Ropporin蛋白一致的蛋白质,利用其免疫动物后,Western blot检测显示该蛋白具有良好的免疫原性,制备的兔抗血清效价>1∶512000,对该蛋白具有高度特异性.结论:利用大肠杆菌原核表达系统表达和纯化了人Ropporin重组蛋白,并成功制备了人Ropporin多克隆抗体.