p16真核表达载体的构建及其稳定表达的NIH3T3细胞株的建立

摘要

目的构建Pcr(R)3.1/p16真核表达质粒,并建立其稳定表达的NIH3T3细胞株.方法将人的p16cDNA亚克隆至Pcr(R)3.1,将该重组质粒转化DH5α感受态大肠埃希菌,筛选阳性克隆,进行EcoRⅠ和XhoⅠ双酶切鉴定及DNA测序,将已鉴定的pCR(R)3.1/p16经脂质体介导转染至NIH3T3细胞中.结果重组质粒双酶切后,出现约800 bp片段,提示p16cDNA片断已插入pCR(R)3.1多克隆位点内,DNA测序显示p16 cDNA按照正确方向和阅读框插入表达载体pCR(R)3.1.通过pCR(R)3.1/p16转染NIH3T3细胞,获得10个G418抗性克隆,其中2个为RT-PCR阳性.结论成功构建pCR(R)3.1/ p16真核表达载体并建立了其稳定表达的NIH3T3细胞株.为建立p16转基因鼠奠定基础.