小鼠晶体蛋白质组的双向电泳和质谱鉴定研究

摘要

目的 应用双向电泳和质谱技术研究5周龄小鼠晶体蛋白质组.方法 提取小鼠晶体总蛋白,进行固相pH梯度 (IPG) 等电聚焦双向电泳,胶体考马斯亮蓝R-250染色,使用P DQuest 7.30图像分析软件分析电泳图像.选择主要蛋白点胶上酶解,应用基质辅助激光解析电离飞行时间/飞行时间 (MALDI-TOF/TOF) 仪器进行串联质谱 (MS/MS) 鉴定. 结果 上样量为882 μg和190 μg时,分别检测370±41蛋白点 (n=3) 和57±5 个蛋白点 (n=3).高上样量能够较好地分离晶体低丰度蛋白,如念珠状纤维结构蛋白BFSP ;低上样量可很好地分离高丰度蛋白-晶体蛋白 (包括αA、αB;βA1～βA4;βB1～β B3;γA～γF和γS等).质谱鉴定得到1种细胞骨架蛋白和16种高丰度晶体蛋白.结论 双向电泳和质谱技术有效考察了晶体总蛋白质,为分析白内障形成过程中蛋白质的表达改变提供了新的方法和途径.