嗜水气单胞菌感染的中华鳖主要器官差减cDNA文库的构建

摘要

以致病性嗜水气单胞菌(Aeromonas hydrophila)人工感染的中华鳖(Trionyx sinensis) 肝、脾、肾组织为材料,应用抑制性差减杂交(SSH)技术,构建了嗜水气单胞菌感染组织的差减cDNA文库.以中华鳖管家基因β-actin作为差减指标检测该文库差减效率达210倍,表明感染细菌后某些差异表达基因得到了相应倍数的富集.将获得的cDNA片段连接到pMD18-T载体并转化大肠杆菌DH5α感受态细胞.PCR阳性检测显示差减片段在150-800bp之间.该差减cDNA文库的构建为快速分离和鉴定中华鳖与细菌感染相关的免疫基因及从分子水平探讨中华鳖的病理和抗感染免疫机制奠定了基础.