致农民肺嗜热吸水链霉菌cDNA文库的构建及相关基因的表达

摘要

目的:构建致农民肺嗜热吸水链霉菌cDNA文库并进行EST测序,通过生物信息学软件分析EST序列同源性及生物学功能,并对其中具有毒力作用的基因进行体外克隆并诱导表达.rn 方法:利用SMART方法构建致农民肺嗜热吸水链霉菌的cDNA文库,并从中随机挑选了1020个克隆进行EST测序.用生物信息学方法分析EST测序结果,并筛选出可能引起人体免疫反应的毒力因子.将这些目的基因克隆至pET-28a载体中,在大肠杆菌BL2(DE3)中转化,通过IPTG进行诱导蛋白质的表达.rn 结果:成功构建了含有978个有义序列,347个单一基因的较高质量的致农民肺嗜热吸水链霉菌cDNA文库.该cDNA文库中含有两段全长分别为1713bp和768bp,并编码517和254个氨基酸的基因,这两段基因与猪胸膜肺炎放线菌外膜蛋白(omla),转铁蛋白B(TbpB)的同源性分别为51％和42％.将这两段基因克隆至原核表达载体中,用宿主IPTG诱导得到表达产物的分子量分别为63kDa和30kDa.rn 结论:所构建的致农民肺嗜熟吸水链霉菌cDNA文库包含全部EST序列,可能包含嗜热吸水链霉菌相关疾病巨大部分毒力分子,这些数据的积累将有助于农民肺特异性毒力分子的进一步筛选,同时为研究农民肺的发病机制奠定基础,如果能准确筛选出相关毒力基因,将为农民肺血清学诊断以及特异性疫苗的研发奠定基础.