致农民肺嗜热吸水链霉菌cDNA文库的构建及体外表达

摘要

目的:构建致农民肺嗜热吸水链霉菌cDNA文库并进行EST测序，通过生物信息学软件分析EST序列同源性及生物学功能，筛选重组阳性基因克隆进行体外克隆并诱导表达。
　　方法:利用SMART方法构建致农民肺嗜热吸水链霉菌的cDNA文库，将平板内克隆进行编号，取前1020个克隆提取质粒，进行EST测序。分析EST测序结果并预测基因功能，从中筛选有关目的基因，将这些目的基因亚克隆入pET-28a载体，将重组子转化大肠杆菌BL2(DE3)，用IPTG诱导相关蛋白的体外表达。
　　结果:成功构建了较高质量的嗜热吸水链霉菌cDNA文库，得到有义序列978个，获得单一基因347个，其中2段基因分别与胸膜肺炎放线菌外膜蛋白(omlA)，转铁蛋白B(TbpB)的同源性为51％和42％，其开放阅读框(ORF)长度分别为1554bp和726bp，分别编码571和241个氨基酸，将2段基因亚克隆入原核表达载体中，IPTG诱导表达产物的相对分子质量分别为63kDa和30kDa。
　　结论:所构建的致农民肺嗜热吸水链霉菌cDNA文库包含全部EST序列，可能包含嗜热吸水链霉菌相关疾病巨大部分毒力分子，这些数据的积累将有助于农民肺特异性毒力分子的进一步筛选，同时为研究农民肺的发病机制奠定基础，如果能准确筛选出相关毒力基因，将为农民肺血清学诊断以及特异性疫苗的研发奠定基础。

目录

声明

摘要

英文缩略语

前言

一、材料与方法

(一)菌株及试剂

(二)cDNA文库的构建

(三)cDNA文库质量及插入片段鉴定

(四)EST测序及序列分析

(五)目的基因的体外表达

二、结果

(一)cDNA文库质量及插入片段长度分析

(二)嗜热吸水链霉菌cDNA文库的EST序列分析

(三)目的基因的体外表达

讨论

本研究创新性的自我评价

参考文献

综述 全长cDNA文库的构建方法概述

在学期间科研成绩

致谢

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