大菱鲆组成型热休克蛋白70的全长cDNA克隆及表达分析

摘要

根据感染哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)的大菱鲆(Scophthalmus maximus)的差减cDNA文库中hsp70 EST序列设计引物,用RACE方法首次克隆到长2188 bp的大菱鲆HSC70(Heat-shock cognate protein 70)全长cDNA序列,包括1956 bp的开放阅读框及5'和3'非翻译区.在预测的651个氨基酸序列中发现了Dnak特征性基序,胞质HSP70特征基序以及四肽简并重复序列.与其他真核生物HSP70家族成员进行同源性比较,发现大菱鲆HSC70与牙鲆(Paralichthys olivaceus)HSC71、虹鳟(Oncorhynchus mykiss)HSC71、人(Homosapiens)HSC70、家鼠(Mus musculus)HSC70、烟草天蛾(Manduca sexta)HSC70的氨基酸相似性分别是97%,95%,94%,93%,86%,表现出较高的保守性.表达分析显示,hsc70 mRNA在大菱鲆正常肝脏、鳃、肠、脾脏、头肾、肾等组织中以不同的水平存在,呈组成型表达;被哈维氏弧菌感染后,大菱鲆肝脏和脾脏组织hsc70 mRNA表达水平分别在24h和12h出现上调(2.5.fold和1.6-fold);注射生理盐水组与未注射组之间差异不显著.