鳞翅目成虫乙醇保存标本基因组DNA的提取及在微卫星研究中的应用

摘要

高质量的基因组DNA样品是分子生态学研究的先决条件.本研究目的在于探索从东方粘虫 Pseudaletia separata (Walker) 成虫自然种群的乙醇保存标本中分离高质量基因组DNA的有效方案.在2 mL微型离心管中进 行4种提取方案的实验比较,结果发现采用传统的苯酚抽提方法的2种方案提取腹部中段组织的基因组DNA,样品合格率只有7.69%~40%.但是,如果在苯酚抽提以前加入高浓度盐和十六烷基三甲基溴化铵(CTAB),就会使DNA样品合格率达到68.42%-95.28%,而且DNA平均产量达到5.59-10.04 ms/g,明显高于前者的2.83~5.78 mg/g(统计检验表明,在不同种群中差异显著或不显著).研究结果还证明腹部组织比胸部组织更适宜提取DNA.对来自一个自然种群的99头东方粘虫DNA合格样品的统计分析表明,DNA提取总量(μg)与组织样品用量(mg)之间存在弱的正相关关系,平均DNA提取量(mg/g)与组织样品用量(mg)之间存在中度负相关关系.总之,在2 mL微型离心管中,用10~20 mg腹部组织,利用CTAB+苯酚抽提方法可以获得高纯度和高含量的基因组DNA样品.用该方案提取的基因组DNA能够顺利地进行微卫星位点的分离和基因分型.