基因组DNA高通量提取技术及其在骨髓库捐献者样本HLA基因分型中的应用

摘要

目的：研究和建立从全血EDTA抗凝样本中高通量提取基因组DNA的有效方法,以常规应用于Luminex rSSO HLA流式磁珠基因分型.方法：使用2mL深孔板和TECAN DNA全自动工作站,从288份骨髓捐献者样本中提取基因组DNA;提取的DNA样本用紫外分光光度仪测定其浓度和纯度,并采用琼脂糖电泳检测DNA的完整性；DNA样本用One lambda rSSO HLA-A、B和DRB1 基因分型试剂盒进行PCR扩增、分子杂交和Luminex流式磁珠分析仪检测,统计分析每一DNA样本HLA-A、B和DRB1基因扩增产物经DNA探针分子杂交后的阳性磁珠和阴性磁珠的荧光信号强度.结果：从400μL全血中提取基因组DNA,288份样本的DNA产量平均为3.217±0.715ug,A260/A280值平均为1.710±0.103,A260 -A320/A280-A320值平均为1.761±0.151;琼脂糖电泳法测得DNA的分子量均大于15kb;每一样本HLA-A、B和DRB1杂交后的阳性磁珠的荧光信号强度均＞600RFU,而阴性磁珠的荧光信号强度＜50 RFU.结论：本方法适用于从大量全血样本中快速提取基因组DNA,所得的基因组DNA适用于高通量中华骨髓捐献者样本的HLA流式磁珠基因分型等下游的分子生物学实验。