三色雷蘑核糖核酸酶的分离纯化和理化性质

摘要

依次采用离子交换层析(DEAE-Cellulose、CM-Cellulose和SP-Sepharose)和凝胶过滤层析(Superdex 75 HR10/300 GL)从三色雷蘑(Leucopaxillus tricolor)子实体中分离纯化得到一种核糖核酸酶(Ribonuclease,RNase).该酶比活为1406 U/mg,纯化倍数为154,通过HPLC-LTQ-Orbitrap测序得到4条肽段序列,分别为DMAVSYLSR、IGLSSIPR、ILGRFVVDTYK和SGKANAATPK.该核糖核酸酶的相对分子质量为15000,最适反应pH为9.0,最适反应温度为40℃,热稳定性高,80℃孵育1h后能保持90％以上的活性:Cu2+、Ca2+、Mn2+、Cd2+和Al3+在1.25～10 mmol/L浓度下对该酶活性具有抑制作用,且抑制作用随着金属离子浓度的升高而变强;Fe2+在1.25～5 mmol/L的浓度下,pb2+、Zn2+、Mg2+、Hg2+、Fe3+在1.25～2.5 mmol/L的浓度下对该酶的活性有促进作用.