影响虎杖毛状根高频诱导的因素探讨

摘要

利用发根农杆菌ATCC15834对虎杖(Reynoutria japonica Houtt.)进行遗传转化,探讨影响其毛状根高频诱导的因素.结果表明:成熟叶片是转化效率较高的外植体,感染10 d左右可形成毛状根,平均诱导率为55.66%,诱根密度为4.30.经PCR检测,证实农杆菌Ri质粒中的rolB及tms基因全部转入毛状根中.改良YEB培养液活化菌种后对出根作用不显著;叶片未经预培养而直接进行感染,其出根效果要明显好于经过MS0或利用TDZ预培养处理(P<0.01),毛状根平均诱导率可达到81.84%,诱根密度为7.04;稀释菌液浸泡、超声振荡或微波辐射处理均可促使叶片提前出根,其中以超声处理30 s效果最显著(P<0.01);感染叶片上表皮向上放置进行共培养有利于毛状根形成.在优化各种转化条件后,虎杖毛状根平均诱导率可提高到97.1%,诱根密度达到11.3.