重组猪干扰素-α单克隆抗体的制备和鉴定

摘要

利用自动发酵罐培养毕赤酵母,甲醇诱导其分泌表达重组猪IFN-α(rPoIFN-α);经硫酸铵沉淀、G-25琼脂糖柱脱盐处理及阴离子交换柱和分子筛层析纯化.以纯化rPoIFN-α蛋白作为抗原免疫6周龄BALB/c鼠3次后,取小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经间接ELISA筛选和3～5次亚克隆,共获得5株均能稳定分泌抗rPoIFN-α单克隆抗体的杂交瘤细胞株.抗体亚类鉴定、特异性和叠加试验结果表明,这5株抗体均属于IgG1亚类,能与rPoIFN-α产生特异性反应,其抗原结合位点相同或相近.该研究有助于进一步推动rPoIFN-α单克隆抗体在猪免疫学以及猪疫病诊断中的应用.