猪a-干扰素单克隆抗体的制备及其特性鉴定

摘要

IFN-α（interferon alpha，IFN-α）是在特定诱生剂的作用下由细胞产生的一种具有生物活性的糖蛋白，可诱导同种动物细胞产生广谱的抗病毒活性。目前已发现近百种疫病能通过动物传染给人，其中很多为病毒性传染病，有些目前尚未发现合适的疫苗和药物来预防和治疗，有些对病毒的生物学特性仍未研究清楚。IFN-α是抗病毒能力最强的干扰素，但无论是医学还是兽医学领域对IFN-α临床应用仍然极为有限，因此开展IFN-α单克隆抗体的研制，为评价机体抗病毒水平以及IFN-α作用机制研究奠定基础，对推动IFN-α在临床上广泛应用具有重要作用。 本研究运用杂交瘤细胞技术，以重组猪IFN-α蛋白免疫BALB/c小鼠，无菌条件下制备小鼠免疫脾细胞，与骨髓瘤细胞SP2/0细胞融合，通过通过GST和GST-pIFN-a双重筛选和多次克隆化培养，成功获得了3株能分泌抗IFN-α的单克隆杂交瘤稳定细胞株。用单克隆抗体亚型鉴定试剂盒鉴定其亚型，确定1株单克隆抗体为IgG2a，2株单克隆抗体为IgG2b。将分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株的染色体计数，发现杂交瘤细胞株染色体平均数为92条，而骨髓瘤细胞株染色体平均数仅为66条，从遗传角度证明确实获得了杂交瘤细胞株；杂交瘤细胞腹水和细胞上清经ELISA检测，腹水中3株杂交瘤分泌单抗的效价均可达1：105，而细胞上清的效价可达到1：104；单抗的抗原结合位点分析表明，3株单抗的抗原结合位点基本一致；SDS-PAGE结果显示，3株单抗的重链分子量均在60ku以上，轻链分子量在30ku以上；在杂交瘤细胞的稳定性试验中，3株细胞经3次克隆化培养，细胞上清中的抗体效价均在1：104～1：105之间，说明该3株杂交瘤细胞分泌单抗的能力稳定，具有较好的遗传稳定性。

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第一部分文献综述1细胞因子概述

1.2.猪干扰素研究进展

1.3猪a干扰素研究进展

1.4抗体的研究进展

1.5本试验的目的与意义

第二部分试验研究第二章猪IFN-a1重组蛋白的原核表达、纯化与鉴定

2.1实验材料

2.2实验方法

2.3结果

2.4讨论

第二部分试验研究第三章 pIFN-a单克隆抗体的制备及鉴定

3.1材料

3.2方法

3.3结果

3.4讨论

第二部分试验研究第四章结论

参考文献

致 谢

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