提高抗地高辛人单链抗体在大肠杆菌分泌型表达的研究

摘要

目的 :提高从半合成噬菌体抗体库中克隆的抗地高辛 (Dig)人单链抗体 (ADAscFv)在大肠杆菌 (E .coli)的分泌表达水平。方法 :①通过PCR从表达质粒 pHEN2 ADAscFv扩增ADAscFv基因并重组于质粒 p3MH构建表达质粒p3MH ADAscFv后 ,转化到E .coliXL1 blue及HB2 15 1;②ADAscFv分别在带有上述 2种表达质粒的E .coliHB2 15 1以及带有表达质粒 p3MH ADAscFv的E .coliXL1 blue进行表达 ,通过ELISA分析培养基上清中的可溶性ADAscFv ;③在培养基中加入蔗糖、甘氨酸及TritonX 10 0 ,通过ELISA分析培养基上清中的可溶性ADAscFv。结果 :①ADAscFv在含表达质粒p3MH ADAscFv的E .coliHB2 15 1及XL1 blue的分泌型表达水平比pHEN2 E .coliHB2 15 1表达系统高约 5倍 ;②在培养基中加入蔗糖 ,可使ADAscFv在含有表达质粒 p3MH ADAscFv的E .coliHB2 15 1及XL1 blue表达系统的分泌型表达提高 5倍多。结论 :通过采用不同的载体 E .coli表达系统以及在培养基中加入不被代谢的蔗糖 ,可使ADAscFv的分泌型表达提高 2