鮰鱼皮明胶ACE抑制肽的制备、分离、纯化及特性研究

摘要

本论文以鮰鱼皮明胶为原料制备ACE抑制肽。首先，以ACE抑制率为指标,研究酶解鮰鱼皮明胶制备ACE抑制肽的工艺条件；然后，通过系统的分离纯化，得到1条具有ACE抑制活性的九肽和一条十八肽；最后，对这两条肽的基本的理化特性进行测定。
　　(1)鮰鱼皮经过脱脂及酸碱处理后用热水抽提，得到鮰鱼皮明胶。以ACE抑制率为指标，分别采用胃蛋白酶、中性蛋白酶、碱性蛋白酶、胰蛋白酶和木瓜蛋白酶对鮰鱼皮明胶进行水解，确定了碱性蛋白酶和胃蛋白酶作为水解明胶用酶。通过响应面优化分析，确定了碱性蛋白酶单独水解鮰鱼皮明胶制备ACE抑制肽的最佳酶解工艺条件为底物浓度5%，加酶量2.2%，pH8.0，温度50℃，酶解时间3h。水解液在碱性蛋白酶最佳酶解条件下水解3h之后，再经胃蛋白酶最适水解条件水解3h，所得明胶水解物的ACE抑制率最高，达到97.83%。
　　(2)分别采用超滤、DEAE离子交换层析、葡聚糖G-15、半制备型RP-HPLC等对酶解液进行分离纯化，采用质谱仪器ultraflexTOF/TOF进行氨基酸序列的测定。首先使用截留分子量分别为3000Da和1000Da的超滤膜分离纯化酶解液。酶解液经超滤后被分成三个组分，Da<1000组分和1000　　(3)对鮰鱼皮明胶ACE抑制肽的体外稳定性进行初步研究，分别考察了温度、pH及常见金属离子等对ACE抑制肽稳定性的影响。实验结果表明：ACE抑制肽具有较强的耐热性，加热到100℃时，其ACE抑制率仍能稳定在90%左右；ACE抑制肽1在碱性条件下较稳定，ACE抑制肽2在酸性条件下较稳定；常见金属离子如K+、Zn2+对ACE抑制肽1、2稳定性基本上没有影响；Ca2+浓度对ACE抑制肽1、2稳定性的影响均比较小；Mg2+浓度对ACE抑制肽1稳定性基本没有影响，对ACE抑制肽2稳定性的影响比较小。Cu2+浓度对ACE抑制肽1稳定性的影响比较小，对ACE抑制肽2稳定性基本没有影响。

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第一章 绪论

1.1 高血压与血管紧张素

1.2 ACE抑制肽研究进展

1.3 利用水产蛋白制备ACE抑制肽研究进展

1.4 斑点叉尾鮰养殖利用现状

1.5 本论文的研究背景、意义及主要内容

1.6 主要研究内容

第二章 鮰鱼皮明胶ACE抑制肽的制备工艺研究

2.1 材料与试剂

2.2 仪器与设备

2.3 实验方法与内容

2.4 结果分析

2.5结论

第三章 鮰鱼皮明胶ACE抑制肽的分离纯化及氨基酸序列分析

3.1 材料与试剂

3.2 仪器与设备

3.3 实验方法与内容

3.4 结果分析

3.5 结论与讨论

第四章 鮰鱼皮明胶ACE抑制肽的稳定性研究

4.1 材料与试剂

4.2 仪器与设备

4.3 实验方法与内容

4.4 结果分析

4.5 结论

第五章 结论与展望

5.1 结论

5.2 展望

参考文献

攻读硕士期间的表现